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溶劑效應(yīng)在液相色譜中的運(yùn)用

  溶劑按化學(xué)組成分為有機(jī)溶劑和無(wú)機(jī)溶劑,而波譜中的應(yīng)用中常用的是有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑是一大類在生活和生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的有機(jī)化合物,分子量不大,常溫下呈液態(tài)。溶劑效應(yīng)是指溶劑對(duì)于反應(yīng)速率,平衡甚至反應(yīng)機(jī)理的影響。溶劑對(duì)化學(xué)反應(yīng)速率常數(shù)的影響依賴于溶劑化反應(yīng)分子和相應(yīng)溶劑化過(guò)渡態(tài)的相對(duì)穩(wěn)定性。

  溶劑效應(yīng)在液相色譜中的影響

  在液相色譜中樣品溶液的溶劑強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度時(shí)可能會(huì)造成的峰展寬、峰分叉現(xiàn)象。

  主要表現(xiàn)為色譜圖上較早洗脫的峰扭曲變形或者開(kāi)叉,與此同時(shí)較晚洗脫的峰則較為尖銳與對(duì)稱,這些現(xiàn)象顯示一個(gè)比較特殊的起因――樣品溶液的溶劑很可能強(qiáng)于流動(dòng)相。例如樣品溶液的溶劑是100%乙腈(100%的強(qiáng)溶劑),而流動(dòng)相的組成則較弱,18%的乙腈與72%的水。第一個(gè)峰是開(kāi)叉的,并且與第二個(gè)峰相比,明顯地變寬了。當(dāng)樣品溶液的溶劑變成流動(dòng)相時(shí),所有的峰形都改善了,且變得尖銳。

  當(dāng)樣品進(jìn)樣時(shí),有可能出現(xiàn)峰展寬,最佳的樣品溶液組成和體積將會(huì)保持在10%甚至更低,在這個(gè)例子里,當(dāng)樣品溶劑與流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度不同時(shí),換句話來(lái)說(shuō),也就是樣品未用流動(dòng)相溶解,因此,有些樣品分子溶解在強(qiáng)溶劑(100%ACE),并隨強(qiáng)溶劑流過(guò)柱子,而有些則溶解在流動(dòng)相中,從而導(dǎo)致峰分叉。

  當(dāng)樣品與流動(dòng)相強(qiáng)度相差較小,進(jìn)樣影響也會(huì)小,第一個(gè)峰可能會(huì)寬于第二個(gè)峰,而當(dāng)這種展寬導(dǎo)致必要的分離度降低時(shí),這樣情況應(yīng)引起注意,例如使用一根短柱,和5UL進(jìn)樣,這與最佳進(jìn)樣體積4UL相近,用了極性更強(qiáng)的溶劑導(dǎo)致分離度明顯的降低。

  避免液相色譜出現(xiàn)這類問(wèn)題的方法

  盡量用流動(dòng)相來(lái)溶解樣品,對(duì)于梯度洗脫,采用初始的流動(dòng)相比例。對(duì)于在流動(dòng)相中溶解度小,必須用強(qiáng)溶劑的時(shí)候,減少進(jìn)樣體積以消除溶劑效應(yīng)的影響。


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